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临床实验报告: |
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美國清肝解毒丹(Liver
Purifier)對老鼠因西藥Acetaminophen及酒精中毒引致肝臟發炎后康復的作用:
| Bobby Echard 醫生 |
| Nadeen Talpur 醫生 |
| Arthur Yin Fan 醫學博士 |
| Debasis Bagchi 醫學博士，藥理研究員 |
| Harry G. Preuss
M.D.著名高級醫學博士，生理學、醫藥和病理學教授 |
| 美國華盛頓佐治城大學醫藥中心 |
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| 此實驗報告已在美國著名的醫學雜誌RESEARCH
COMMUNICATIONS IN MOLECULAR PATHOLOGY AND PHARMACOLOGY（Page73, Vol.
110, NOS. 1&2）公佈 |
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| 摘要： |
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天然植物如中藥等產品已嘗試用於在克服因攝取肝毒性物質而導致的肝功能不良。然而，許多關於植物產品的使用只是傳聞而已，有效的動物實驗可提供數據來証明有些天然產品有可能預防或改善因藥物毒性導致的肝功能不良。 |
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本課題是研究天然植物組合對大白鼠因口服西藥(Acetaminophen)及純酒精引起的急性肝臟損傷所產生的保健作用。 |
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我們利用轉氨酉每AST和ALT（血清谷草轉氨酉每和谷丙轉氨酉每）的升高作為肝中毒的主要標記而分別設計了四個實驗。第一個實驗用以確定西藥（Acetaminophen）導致急性肝中毒的劑量。第二和第三個實驗研究，清肝解毒丹對西藥（Acetaminophen）導致急性肝細胞中毒的保肝能力。最後一個實驗，研究清肝解毒丹對酒精引起的肝中毒以及西藥（Acetaminophen）與酒精同時引起的肝中毒治療作用。 |
| 實驗結果表明，大白鼠口服2
mg/kg的西藥（Acetaminophen）可導致肝臟中毒，可引起AST和ALT水平的升高。口服清肝解毒丹可明顯改善西藥（Acetaminophen）對動物肝臟的毒性，也可以減低酒精引起的肝中毒。 |
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我們的結論是清肝解毒丹可有效地降低西藥（Acetaminophen）及酒精引起的肝毒性。 |
| 前言： |
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許多中藥等天然產品已經使用在促進肝臟健康和克服因不同病因引起的肝功能失調。現有關於草藥和植物化學物的治療資料大部分來源於傳說，越來越多的動物實驗和臨床研究開始提供證據証明有些天然產品有可能預防或改善因藥物等病理侵襲導致的肝臟病變。盈薊草、綠茶提取物、葡萄子核提取物、松樹皮和Resveratral等植物已經在一些研究中表現出療效。然而，我們需要更努力的研究來尋找更好、更安全及容易服用的天然保肝產品。 |
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| 本研究的主要目的是驗證美國清肝解毒丹(Liver
Purifier)對大鼠因西藥（Acetaminophen）及純酒精而引起急性肝臟損傷的保護作用。 |
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| 材料和方法： |
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動物：Sprague-Dawley種大白鼠體重150－200g，由紐約德國城Taconic
Farms提供。為了適應環境，大鼠運到后飼養三天后再開始實驗。所有實驗動物飼以大鼠標準料塊及水自由進食，實驗用的西藥（Acetaminophen）及清肝解毒丹溶于阿拉伯橡膠口香糖和水
(10％V/V)的乳濁液，灌胃口服。酒精配成50％（w/w）的水溶液后口服。對照組口服相等體積的橡膠口香糖水混合物。 |
| 草藥的配方（分紅色和白色膠囊） |
| 清肝解毒丹 (Liver Purifier)
配方分紅色、白色兩組不同配方的膠囊。紅色膠囊每天兩次，每次餐後三粒膠囊。每粒紅色膠囊含有多種植物組合配成。白色膠囊的服用方法是每天兩次，每次餐前三粒膠囊。每粒白色膠囊含有瑞士花粉提取物200毫克；蜂皇漿提取物150毫克，美國野山參提取物80毫克。按每公斤體重算大鼠口服劑量是人臨床用量的七倍。（攝取量的比例是按動物與人重量及代謝因子而定） |
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| 步驟：整個研究分四組實驗進行： |
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在第一個實驗：動物分組后，口服不同劑量的西藥（Acetaminophen） (0.5、1.0、和2.0
g/kg的體重)，對照組動物給予相同體積的溶劑作為對照。動物給西藥（Acetaminophen）前（Oh,
baseline）及給西藥（Acetaminophen）后24 hr,72 hr和168
hr后，尾部抽血進行化學分析，從而求出西藥（Acetaminophen）對大鼠肝損傷的劑量反應曲線。 |
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在第二和第三組實驗研究了清肝解毒丹對西藥（Acetaminophen）引起的肝中毒的保護作用。為了造成適度的毒性，西藥（Acetaminophen）的口服劑量選用2
g/kg。每組實驗設實驗組和對照組，每組6只大鼠。第二組實驗中大鼠同一時間口服清肝解毒丹紅色膠囊與白色膠囊，紅色膠囊75
mg/天/只，白色膠囊43
mg/天/只。對照組口服相同體積的溶劑。連續灌胃七天后，對照組與給藥組都給予單一劑量的西藥（Acetaminophen ）2.0
g/kg。在動物灌服西藥（Acetaminophen）的同日，實驗組動物繼續口服相同劑量的清肝解毒丹紅白膠囊七天。對照組也繼續給予相同體積的溶劑。為了模仿臨床病人，紅色膠囊與白色膠囊分開服用的給藥方式，即白膠囊飯前服用，紅膠囊飯後服用，第二組動物紅膠囊在傍晚天黑之前給予，白膠囊在每天清早給予。而第一組動物一樣，以上兩組動物都在給予西藥（Acetaminophen）的0、1、3、7天由尾部抽血測定。實驗結果表明第二組和第三組動物的數據合併進行數理統計。 |
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第四組實驗由三組動物組成，每組10只大鼠。對照組動物口服連續七天， 第二組動物每天口服純酒精1 ml/kg，連續一週，
第三組動物口服純酒精每天1 ml/kg的同時也口服清肝解毒丹，劑量同前，紅膠囊75 mg/天，白膠囊43
mg/天。第七天，所有動物抽血做化學分析，同時再口服西藥（Acetaminophen） 2 ml/kg
。24小時后，第二次抽血進行化學分析。 |
| 血和血清的化學物質(ALT、AST
、碱性磷酸酉每、膽固醇、甘油三脂、血尿素氮) 的測定，按實驗室常規進行。 |
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| 結果： |
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西藥（Acetaminophen）誘發肝細胞中毒劑量： |
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從圖1和圖2可以看出動物口服西藥（Acetaminophen ）0.5 g/kg和1.0
g/kg在一週內沒有影響血循環中轉氨酉每（AST，ALT）的濃度。然而，口服2 g/kg的西藥（Acetaminophen
）24小時后可引起轉氨酉每（AST、ALT）的明顯升高。口服三天后血清轉氨酉每的濃度仍然高于對照組，但是，沒有數理統計的顯著性。口服七天后，血清轉氨酉每濃度與對照組基本上相同。與對照組動物比較，造型組動物的其它檢驗指標，膽固醇、甘油三脂、鹼性磷酸酉每，肌酉干和血尿素氮的水平與對照組相近（見表1），唯一例外的是動物口服西藥（Acetaminophen
） 2 g/kg后72小時膽固醇和肌酉干濃度略有升高，但統計學上無顯著差異。 |
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清肝解毒丹對西藥（Acetaminophen）引起的肝中毒的作用： |
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圖三和圖四表示，實驗組與對照組動物（每組10只）口服西藥（Acetaminophen） 2
mg/kg后七天內觀察其血液中轉氨酉每（AST、ALT）水平的變化。與第一組結果相似，對照組動物口服一次劑量的西藥（Acetaminophen）后，血中兩種轉氨酉每的濃度都明顯地升高，而實驗組動物在給予西藥（Acetaminophen）前後都口服一週的清肝解毒丹其血液ALT的水平基本上不變。與AST的結果一致。實驗組動物血液ALT水平的升高比對照組要少得多。總之，與對照組比較，大鼠給予西藥（Acetaminophen）前後服用清肝解毒丹，其口服西藥（Acetaminophen）
24 hr和72 hr后血液轉氨酉每AST和ALT明顯低於只服西藥（Acetaminophen）的對照組動物。 |
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清肝解毒丹對單獨酒精及酒精酚聯合使用引起的肝中毒的影響： |
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在第四個和最後的實驗中（圖表5和6），一組10只小白鼠口服酒精7天與口服同體積的水的對照組相比，其血青谷草和谷丙轉氨酉每明顯升高。那些在服用酒精同時也服用清肝解毒丹的大白鼠，因酒精作用使兩項肝酵素升高的現象消失了（圖表5和6）。這証明了清肝解毒丹能有效地降低轉氨酉每。在這一同樣的實驗中，同時測定腎臟參數，血液的尿素氫和肌氨酉干（數表2）。三組都沒有明顯的差異：控制組，口服酒精組，口服酒精而同時服用清肝解毒丹組。（這証明了清肝解毒丹沒有副作用）。兩組大白鼠服用酒精一個星期；其中一組再服用清肝解毒丹；然後這兩組都口服西藥（Acetaminophen）（2
g/kg）。24小時后抽血檢查血青谷草和谷丙轉氨酉每，數值如下：1. 口服酒精和西藥（Acetaminophen）組：205
±42（SEM）和92 ±19.1（SEM）， 2. 口服酒精、西藥（Acetaminophen）和清肝解毒丹組: 114 ±20.8
(SEM) (P <0.05)和69 ±11.9 (SEM)。 |
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| 討論： |
| 植物保健品用于促進肝臟健康已有几百年的歷史。
雖然真正的保肝機理還未明確，但人們已經提出了許多理論。其中，氧化作用被認為是在眾多的肝臟疾病及肝中毒中扮演了主要的角色。
綠茶和葡萄子核提取物對肝臟的保護作用就是基於它的抗氧化能力。在研究盈薊草的主要成份Silibinin對清除自由基的研究中，發現這種抗氧化物也能提高細胞內的谷胱甘月太的水平，從而加強肝臟抗自由基的能力。越來越多的證據表示，許多非營養性植物化學物質具有與肝臟保健的生物活性包括：利膽劑的抗氧化作用，防癌，消炎及誘導有排毒活性的酉每。大鼠的研究顯示盈薊草能提高膽汁的排泄，同時能增加內源性膽鹽。另一個可能的保肝機理是盈薊草能增加蛋白合成和抗雌激素的作用。 |
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在目前的研究中，清肝解毒丹用兩種不同的膠囊配合能有效地減少因西藥（Acetaminophen）和酒精誘發的肝細胞毒性。常用于止痛的藥物在動物實驗及臨床上有導致肝小葉中心部分壞死的可能性。是通過細胞色素P450的代謝來形成N-acetyl-p-benzoquinone
。如沒有谷胱甘月太 GSH配合解毒，N-acetyl-p-benzoquinone高活性是極高活性。服食使肝臟谷胱甘濃度過度減少，伴隨著自由基引起高度脂過氧化作用。實驗表明人的尿制劑可資料腹腔注射引起的肝損傷。 |
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我們研究的主要目的是找到容易得到的、口服的、安全的和比從前用的保肝更有效的天然產品。美國清肝解毒丹方便使用，安全無副作用。配方中的每一種原料對保肝的功能已經在參考書目26-29記錄了。 |
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我們模擬了兩種可能造成人類肝臟損傷條件，即短期的大量服用西藥（Acetaminophen）和純酒精。體內腹腔注射能產生更明顯的傷肝，但本研究是試圖模擬人的口服西藥（Acetaminophen）造成的急性肝中毒。清肝解毒丹對因西藥（Acetaminophen）和酒精引起肝臟的血青谷草轉氨酉每和谷丙轉氨酉每升高有非常明顯的改善作用，而對身體如腎臟等沒有任何副作用，因此，清肝解毒丹兩組膠囊配合真能有效地減少大鼠口服西藥（Acetaminophen及酒精引起的毒性。 |
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Figure 1 |
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AST (血清谷草轉氨酉每SGOT) 代表肝臟發炎的肝功能指數 |
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大白鼠口服不同劑量的西藥Acetaminophen對血清穀草轉氨酉每昇高的影響。
大鼠口服西藥Acetaminophen 2g/kg
24hr後引起AST顯著的昇高﹐這一劑量定為西藥Acetaminophen肝中毒模型的劑量。 |
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Figure 2 |
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AST (血清穀丙轉氨酉每SGOT ) 代表肝臟發炎的肝功能指數 |
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大白鼠服食不同劑量的西藥Acetaminophen對血清穀丙轉氨酉每的影響﹐大鼠口服西藥Acetaminophen 2g/kg
24hr後可引起ALT明顯的昇高。 |
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Figure 3 |
| AST
(血清穀草轉氨酉每SGOT) 代表肝臟發炎的肝功能指數 |
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■橙色線： 小白鼠服用2
g/kg西藥Acetaminophen24小時後﹐其血清穀草轉氨酉每有明顯的昇高。 |
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■藍色線：小白鼠服用西藥Acetaminophen之前和之後都服用了清肝解毒丹﹐其血清穀草轉氨酉每呈現非常明顯的下降。 |
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Figure 4 |
| AST
(血清穀丙轉氨酉每 SGOT) 代表肝臟發炎的肝功能指數 |
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■橙色線：
小白鼠服用2 g/kg西藥Acetaminophen24小時後﹐其血清穀丙轉氨酉每有明顯的昇高。 |
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■藍色線：
小白鼠服用西藥Acetaminophen之前和之後都服用了清肝解毒丹﹐其血清穀丙轉氨酉每呈現非常明顯的下降。 |
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Figure 5 |
| AST
(血清谷草轉氨酉每 SGOT) 代表肝臟發炎的肝功能指數， |
■綠色表示對照組(喝水)。
■橙色表示小白鼠口服50度的酒精后AST指數升高。
■藍色表示小白鼠口服50度的酒精及清肝解毒丹之後，AST指數明顯下降。 |
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Figure 6 |
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ALT (血清谷丙轉氨酉每SGPT ) 代表肝臟發炎的肝功能指數， |
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■綠色表示對照組
( 喝水 )。 |
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■橙色表示小白鼠口服50度的酒精后ALT指數升高。 |
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■藍色表示小白鼠口服50度的酒精及清肝解毒丹之後，ALT指數明顯下降。 |
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| 數表1 |
|
|
服用不同劑量的西藥（Acetaminophen）在0、1、3和7天所顯示的化學數據 |
|
|
|
膽固醇 (mg/dl) |
| 對照組 |
63.4+/-2.9
|
66.8+/-2.8
|
66.2+/-4.6
|
70.6+/-1.4 |
| Acetaminophen (0.5
g/kg) |
71.8+/-5.0 |
79.8+/-4.0 |
74.2+/-5.5 |
71.4+/-7.1 |
| Acetaminophen (1.0
g/kg) |
68.4+/-0.4
|
74.8+/-2.6 |
68.6+/-1.6
|
63.4+/-1.0 |
| Acetaminophen (2.0
g/kg) |
76.4+/-5.2 |
75.8+/-4.0
|
91.2+/-9.9* |
72.2+/-1.7
|
|
|
|
三酸甘油酉旨 (mg/dl) |
| 對照組 |
100+/-2.7 |
207+/-17.7
|
161+/-6.5
|
160+/-13.2
|
| Acetaminophen (0.5
g/kg) |
109+/-8.3
|
182+/-23.0
|
175+/-18.9
|
227+/-12.0 |
| Acetaminophen (1.0
g/kg) |
113+/-11.0
|
179+/-11.8
|
146+/-17.2
|
160+/-5.5
|
| Acetaminophen (2.0
g/kg) |
113+/-3.2
|
155+/-12.1
|
169+/-17.6
|
160+/-12.5 |
|
|
|
碱性磷酸酉每 (units/dl) |
| 對照組 |
178+/-11.2
|
228+/-9.4
|
236+/-10.6
|
234+/-8.6 |
| Acetaminophen (0.5
g/kg) |
164+/-12.1
|
228+/-18.9
|
238+/-24.8
|
226+/-27.6 |
| Acetaminophen (1.0
g/kg) |
197+/-14.7
|
257+/-22.7
|
246+/-23.1
|
235+/-25.4 |
| Acetaminophen (2.0
g/kg) |
182+/-16.5
|
251+/-20.3
|
276+/-47.3
|
265+/-22.4 |
|
|
|
肌氨酉干(mg/dl) |
| 對照組 |
0.6+/-.04
|
0.5+/-.05 |
0.6.+/-05
|
0.6+/-.04 |
| Acetaminophen (0.5
g/kg) |
0.6+/-.06
|
0.4+/-.02 |
0.7+/-.07
|
0.6+/-.08 |
| Acetaminophen (1.0
g/kg) |
0.8+/-.17
|
0.4+/-.05
|
0.9+/-.17
|
0.7+/-.04 |
| Acetaminophen (2.0
g/kg) |
0.6+/-.00
|
0.6+/-.13
|
1.0+/-.08*
|
0.6+/-.07 |
|
|
|
血液中的尿素氫(mg/dl) |
| 基本線 |
17+/-1.9
|
21+/-2.1
|
22+/-1.5
|
20+/-1.3 |
| Acetaminophen (0.5
g/kg) |
17+/-2.5
|
18+/-0.7
|
24+/-2.3
|
25+/-4.3 |
| Acetaminophen (1.0
g/kg) |
24+/-3.4
|
20+/-2.0
|
28+/-4.0
|
25+/-2.4 |
| Acetaminophen (2.0
g/kg) |
16+/-1.6
|
19+/-2.1
|
25+/-0.7
|
22+/-1.2 |
|
|
五只老鼠的平均 ±SEM如上顯示。 |
|
| 數表 2 |
| 腎臟參數 |
|
血尿素氮 (mg/dl) 肌氨酉干 (mg/dl) |
| 控制組 |
23 +/- 1.7
|
0.3 +/- 0.04 |
| 服食酒精組 |
24 + 1.8 |
0.4 + 0.07 |
| 服食酒精＋清肝解毒丹組 |
28 + 5.3
|
0.5 + 0.22 |
| |
|
|
|
|
每組10只老鼠，平均值 ±SEM如上顯示
。三組都沒有明顯的差異。這証明了清肝解毒丹沒有副作用。 |
